流式細(xì)胞儀(Flow cytometer )是對細(xì)胞進(jìn)行自動(dòng)分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細(xì)胞的一系列重要的生物物理、生物化學(xué)方面的特征參量,并可以根據(jù)預(yù)選的參量范圍把指定的細(xì)胞亞群從中分選出來。多數(shù)流式細(xì)胞計(jì)是一種零分辨率的儀器,它只能測量一個(gè)細(xì)胞的諸如總核酸量,總蛋白量等指標(biāo),而不能鑒別和測出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是說,它的細(xì)節(jié) 分辨率為零。
BD 流式細(xì)胞儀中激光產(chǎn)生的光被樣品中的細(xì)胞散射,由檢測器測量,然后轉(zhuǎn)換為可以分析和測量的信號(hào)。本設(shè)備所采用的技術(shù)是一種用于分析細(xì)胞的具有多種應(yīng)用的技術(shù),包括細(xì)胞計(jì)數(shù)、表型分析、細(xì)胞周期評(píng)估和生存力檢測等不同應(yīng)用。
BD 流式細(xì)胞儀儀器主要由哪四個(gè)系統(tǒng)組成:
1.流動(dòng)室和液流系統(tǒng):
流動(dòng)室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成。將懸浮分散的單細(xì)胞懸液,經(jīng)特異性熒光染料染色后,放入樣品管。在氣體壓力下,樣品管中的單細(xì)胞懸液進(jìn)入BD 流式細(xì)胞儀的流動(dòng)室,鞘液約束細(xì)胞排列成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出,成為細(xì)胞液柱。
2.光電管和檢測系統(tǒng):
細(xì)胞所產(chǎn)生的熒光通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號(hào)而進(jìn)行測量。這些信號(hào)分別被成90℃角方向放置的光電倍增熒光檢測器和前向角放置的光電二極管檢測器接收,經(jīng)過轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)換為電子信號(hào)。
3.激光源和光學(xué)系統(tǒng):
經(jīng)特異熒光染色的細(xì)胞需要合適的光源照射激發(fā)才能發(fā)出熒光供收集檢測。細(xì)胞液柱與水平方向的入射激光束垂直相交,相交點(diǎn)稱為測量區(qū)。通過測量區(qū)的細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光,同時(shí)產(chǎn)生光散射。
4.計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng):
經(jīng)轉(zhuǎn)換后的電信號(hào)被送往計(jì)算機(jī)分析器。計(jì)算機(jī)通過相應(yīng)的軟件儲(chǔ)存、計(jì)算、分析,就可以得到細(xì)胞的大小和活性、核酸含量等理化指標(biāo)。