酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)都是實(shí)驗(yàn)室常用的分析測量工具,它們的測定原理是相同的,都是使用朗伯-比耳定律,測定的都是樣本的吸光度。
一、酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)的三大差別
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器又稱微孔板檢測器??珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個(gè)比色計(jì),即用比色法來進(jìn)行分析。測定一般要求測試液的最終體積在250μL以下,用一般光電比色計(jì)無法完成測試,因此對酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有特殊要求。
分光光度計(jì),又稱光譜,是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線的科學(xué)儀器。測量范圍一般包括波長范圍為380~780nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~380nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。
同為,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測定吸光度的儀器,酶標(biāo)儀和分光光度計(jì)存在一些不同之處,具體差別體現(xiàn)在以下三個(gè)方面:
(1)盛裝待測溶液的容器:
分光光度計(jì)用的是比色皿,酶標(biāo)儀使用的是塑料微孔板(酶標(biāo)板)。比色皿只能起到盛裝溶液的作用,每個(gè)比色皿一次只能盛裝一種溶液。酶標(biāo)板常用透明的聚乙烯材料制成,對抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用,因此用它作為固相載體,酶標(biāo)板通常為48孔或96孔,每個(gè)微孔可以盛裝不同的溶液。
(2)光路的方向:
分光光度計(jì)是水平光路,而酶標(biāo)儀則是垂直光路。由于酶標(biāo)板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標(biāo)儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點(diǎn)是標(biāo)本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標(biāo)板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長度:
由于光密度(OD值)與吸光系數(shù),待測組分的濃度以及光路長度成正比關(guān)系。
分光光度計(jì)采用的比色杯的寬度通常是1cm,所以光路長度固定為1cm。因此不同儀器,不同批次測量的數(shù)據(jù)具有同樣的可比性。
而酶標(biāo)儀采用的是垂直光路,所以光路的長度應(yīng)該是液體液面的高度。所以測得的值受到樣品的體積的影響。